天天AV天天翘天天综合网,国产综合在线观看,97久久精品人人澡人人爽,熟妇人妻VA精品中文字幕

歡迎進入柏萊源(天津)生物科技有限公司網(wǎng)站!
13302035784
技術(shù)文章

TECHNICAL ARTICLES

當前位置:首頁  -  技術(shù)文章  -  PCR體系及各類常見PCR辨析

PCR體系及各類常見PCR辨析

更新時間:2023-11-06點擊次數(shù):842

聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction)簡稱PCR,是一種體外高效擴增特定DNA片段的分子生物學技術(shù)。該技術(shù)的發(fā)明人是Kary Mullis,他從1983年開始研究PCR技術(shù),1985年開始被逐漸采用,成為分子生物學的一項常規(guī)手段,并得到了廣泛的應(yīng)用,在臨床診斷、生物醫(yī)學研究和法醫(yī)學領(lǐng)域都具有重要意義。PCR是在體外模擬體內(nèi)DNA復制的過程,它用加熱的辦法讓需要擴增的DNA片段變性解鏈成兩條單鏈,人工合成的一對引物讓它們結(jié)合到DNA模板(分別結(jié)合到兩條鏈上)的兩端,DNA聚合酶即可以大量復制該模板。了解了PCR的基本過程,再一起來學習一下PCR體系及各類常見PCR辨析吧!

PCR體系

1. 模板

需要研究或擴增的目的核酸分子,DNA可以直接擴增,RNA需要增加一步逆轉(zhuǎn)錄,或者在體系中加逆轉(zhuǎn)錄酶一步法進行RT-PCR擴增;

2. 引物

良好設(shè)計的引物,是擴增特異性及擴增效率的關(guān)鍵因素之一;

3. Taqase

PCR體系的核心組分,Taqase的性能,直接決定了擴增體系能否達到實驗要求;

針對不同類型的模板、特異性的要求、產(chǎn)物保真度的要求、擴增產(chǎn)物的長度,需要選用能滿足對應(yīng)要求的Taqase;所選用的酶如果不匹配,實驗是無法成功的;

對一株Taqase的性能評價,主要是如下幾個方面:擴增效率,擴增速度,保真度,除了催化鏈延伸之外的其它活性,抗逆性等;

4. dNTP

dNTP的濃度和質(zhì)量,也是影響擴增產(chǎn)率的一個重要因素;dNTP分子中,含有一個高能磷酸鍵,是影響dNTP穩(wěn)定性的關(guān)鍵因素,高能磷酸鍵的斷裂也是造成dNTP質(zhì)量不合格的分子層面的原因;

5. Buffer

為PCR反應(yīng)體系提供穩(wěn)定的工作環(huán)境,主要環(huán)境因素為pH值,離子強度等;

6. Mg++

因為鎂離子對Taqase活性影響大,所以一般buffer之外,還單獨帶一管Mg++,方便用戶靈活調(diào)節(jié)體系里面Mg++濃度;

除了上述六種必要的組分之外,還有較多的工具蛋白或者小分子化合物,能對PCR體系起到相應(yīng)的作用,這方面累積的研究成果也比較多。

各類常見PCR辨析

1. PCR,通常指的是普通PCR,以雙鏈DNA為模板,以dNTP為底物,大量(30個循環(huán)理論上可以使產(chǎn)物增加到模板初始摩爾數(shù)的10的9次方倍)擴增雙鏈DNA。產(chǎn)物通常以電泳及凝膠成像方式來分析。

2. qPCR和Real-time PCR,指的是實時熒光定量PCR,以DNA或cDNA為模板,以dNTP為底物,以熒光基團為報告分子,收集熒光信號從而對擴增出的DNA進行定量分析。為避免和RT-PCR(逆轉(zhuǎn)錄PCR)混淆,現(xiàn)在一般不太常用real-time PCR,通常交流,用qPCR指代更明確。

3. RT-PCR,指的是逆轉(zhuǎn)錄PCR,以由mRNA逆轉(zhuǎn)錄成的cDNA為模板,以dNTP為底物,進行DNA的擴增及檢測。

4. RT-qPCR,指的是實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR,是qPCR+RT-PCR的組合,將總RNA或mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后再作為模板,以dNTP為底物,進行產(chǎn)物的定量分析。

507c24d3c823966d605e2e732fa4b8bd.png




2473262194

TEL:13302035784

微信咨詢

色老头在线一区二区三区| 亚洲不卡无码AV中文字幕| 97精品人人a片免费看| 日日狠狠久久8888偷偷色| 国内国外日产一区二区| 强行挺进朋友漂亮的娇妻| 久久亚洲精品AB无码播放| 两个女人互添下身高潮| 日日摸夜夜添无码无码AV| 强行挺进美艳老师的后臀| 人人妻人人玩人人澡人人爽| 欧美与黑人午夜性猛交久久久| 学生姝被内谢出白浆| 久久亚洲国产成人精品无码区 | 浪货趴办公桌~h揉秘书| 性色av无码| 国内老熟妇对白XXXXHD| 久久人人爽天天玩人人妻精品| 闺蜜和我被黑人4p到惨| 国产精品亲子乱子伦XXXX裸| 18禁白丝喷水视频www视频| 最新无码国产在线视频2021| 99久久精品国产| 一本大道久久香蕉成人网| 亚洲中文字幕久久精品无码喷水| 廖承宇做受被c22分钟视频| 潘金莲被武松高潮八次小说| 99精品久久99久久久久 | 国产精品视频永久免费播放| 亚洲AV无码一区二区三区系列| 狠狠躁夜夜躁人爽碰88a| 少妇无码一区二区三区免费| 舌头伸进去添的我爽高潮| 国产色欲AV一区二区三区| 少妇真实被内射视频三四区| 国产精品久久久| 精品国产你懂的在线观看| 男男调教后菊撑开扩张a片| 成人做爰高潮a片免费视频| 任你躁国语自产在线播放| 男生把手放进我内裤揉摸好爽|